Højtydende væskekromatografi omfatter hovedsageligt injektionssystem, infusionssystem, separationssystem, detektionssystem og databehandlingssystem. Det følgende vil introducere deres respektive sammensætninger og karakteristika.
1. Injektionssystemet bruger generelt en membraninjektor eller et højtryks-injektionskammer til at fuldføre injektionsoperationen med et konstant injektionsvolumen. Dette er en fordel for at forbedre reproducerbarheden af prøveanalyse.
2. Infusionssystemet består af tre dele: en højtrykspumpe, et mobilfasereservoir og en gradientmåler. Det generelle tryk for en højtrykspumpe er l. 47-4.4X107Pa, justerbar og stabil flowhastighed. Når højtryksmobilfase passerer gennem den kromatografiske søjle, kan det reducere diffusionseffekten af prøven inde i søjlen, accelerere bevægelseshastigheden inde i søjlen, forbedre separationsgraden og genvinde prøven. Fordelagtig til at opretholde prøvens biologiske aktivitet. Den mobile fase lagringsfejl og gradientanalysator kan ændre den mobile fase i overensstemmelse med egenskaberne af den stationære fase og prøven, herunder ændring af polariteten, ionstyrken og pH-værdien af eluenten, eller brug af konkurrerende inhibitorer eller denatureringsmidler. Dette muliggør effektiv adskillelse af flere stoffer, selvom der kun er ét sæt forskelle eller isomerer.
3. Separationssystemet omfatter kromatografisøjler, forbindelsesrør, termostater osv. Længden af den kromatografiske søjle er generelt 10-50cm (hvis der er behov for to, kan der tilføjes et forbindelsesrør mellem dem), med en indre diameter på 2-5mm, lavet af højkvalitets rustfrit stål eller tykvægget glasrør eller titanlegering. Der er en fast fase med en partikelstørrelse på 5-10 μm (sammensat af en matrix og et fiksativ). Matrixen i den stationære fase er lavet af harpiks eller silicagel med høj mekanisk styrke, som har inerthed (såsom alkalisk silicagel er blevet fjernet), porøsitet (porestørrelse op til 1000?) og stort specifikt overfladeareal. De er mekanisk belagt til kobling (svarende til fremstilling af gaskromatografi stationære faser), eller kemisk koblet med forskellige gener (såsom fosfat, kvaternær amino, hydroxymethyl, phenyl, amino eller forskellige længder af carbonkæde alkyl) eller ligand organiske forbindelser . Så denne faste relative struktur har god selektivitet. For eksempel, efter kobling af ærteagglutinin (PSA) på overfladen af porøs silicagel, kan glycoproteiner i fibroblaster isoleres. Derudover er det stationære fase-baserede plasmid lille, og søjlelejet er let at opnå en ensartet og tæt tilstand. Det er let at reducere hvirvelstrømsdiffusionseffekten. Matrixpartikelstørrelsen er lille, mikroporerne er overfladiske, og masseoverførslen af prøven i det mikroporøse område er kort. Disse er gavnlige til at reducere båndbredden og forbedre opløsningen. Ifølge kolonneeffektteorianalysen, jo mindre matrixpartikelstørrelsen og jo større er det teoretiske tal N på pladen. Dette beviser yderligere, at jo mindre matrixpartikelstørrelsen er, desto højere er separationsgraden. Derudover kan højtydende væskekromatografitermostater justere temperaturen fra stuetemperatur til 60 grader, hvilket forkorter analysetiden ved at øge masseoverførselshastigheden., Det kan forbedre effektiviteten af den kromatografiske søjle.
4. De almindeligt anvendte detektorer til HPLC-detektionssystemer omfatter ultraviolette detektorer, brydningsindeksdetektorer og fluorescensdetektorer.
(1) UV-detektoren er velegnet til at detektere prøver med absorptionsegenskaber under ultraviolet (eller synligt) lys. Dets egenskaber: bredt anvendelsesområde (såsom proteiner, nukleinsyrer, aminosyrer, nukleotider, peptider, hormoner osv.); Høj følsomhed (detektionsgrænse på 10-10g/ml); Bredt lineært område; Ikke følsom over for ændringer i temperatur og flowhastighed; Kan detektere prøver elueret med gradientopløsninger.
(2) Differentiel brydningsindeksdetektor kan bruges til at detektere alle prøvekomponenter med brydningsindeks, der er forskellige fra dem, der detekteres af mobilfasedetektor. På nuværende tidspunkt påvises de fleste kulhydratforbindelser ved hjælp af dette detektionssystem. Systemet har stærk universalitet og enkel betjening, men lav følsomhed (detektionsgrænse på 10-7g/ml), og ændringer i den mobile fase kan forårsage ændringer i brydningsindekset. Derfor er den hverken egnet til sporanalyse eller til påvisning af gradientelueringsprøver.
(3) Fluorescensdetektoren er kun egnet til bestemmelse af fluorescerende organiske forbindelser (såsom polycykliske aromatiske kulbrinter, aminosyrer, aminer, vitaminer og visse proteiner) under visse forhold, baseret på fluorescensintensiteten og koncentrationen af det udsendte lys. Dens følsomhed er meget høj (detektionsgrænsen er 10-12~10-14g/ml), og den kan bruges til sporanalyse og detektion i gradientelueringsarbejde.
5. Databehandlingssystemet kan indsamle, opbevare, vise, udskrive og behandle testdata for at adskille prøver og kan korrekt udføre forberedelses- eller identifikationsarbejde